Wir freuen uns, Ihnen die folgenden Studien vorstellen zu dürfen, die Ende August auf dem ESVD-ECVD-Kongress in Lille präsentiert wurden. Das wichtigste Highlight ist das Poster „Analytische Leistungsfähigkeit von drei Allergen-Serumtests bei Hunden, bewertet anhand künstlicher Seren mit vordefinierten allergenspezifischen monoklonalen IgE-Antikörpern“, in dem die analytische Leistungsfähigkeit von drei serologischen Allergen-Tests bei Hunden systematisch verglichen wird. Darüber hinaus wurden am Donnerstag, dem 27. August, im Rahmen des „Cutting Edge“-Programms drei weitere Vorträge gehalten, die die Erkenntnisse zur allergenspezifischen IgE-Diagnostik weiter untermauern.
Das Poster: Analytische Validierung von drei serologischen Allergentests
Das Poster wurde von Freja Krogh und Lene Boysen (Vetgruppen Birkerød Dyrehospital, Dänemark) verfasst und von Nextmune AB, der Dänischen Vereinigung für Veterinärdermatologie sowie dem Vetgruppen Birkerød Dyrehospital finanziell unterstützt. Die Studie befasst sich mit einem methodischen Problem, das der vergleichenden Forschung zu Serum-Allergentests (SAT) innewohnt: Da bei natürlich sensibilisierten Hunden die IgE-Zusammensetzung nicht bekannt ist, lassen sich abweichende Ergebnisse zwischen Laboren nicht mit Sicherheit einer echten biologischen Variation gegenüber einem analytischen Artefakt der verwendeten Testmethode zuordnen.
Um dies zu lösen, wandten die Autoren ein kontrolliertes Versuchsdesign an. Künstliche Seren (IgE-abgereichertes fötales Rinderserum) wurden mit im Labor hergestellten, allergenspezifischen monoklonalen IgE-Antikörpern des Hundes gegen drei definierte Allergene versetzt: Phl p 5 (Phleum pratense, Lieschgras), Der f 2 (Dermatophagoides farinae) und Pla a 3 (Platanus). Es wurden elf Seren mit vordefinierter IgE-Zusammensetzung hergestellt, darunter eine Negativkontrolle, bestehend aus Der f 2-spezifischem IgG-B (IgG1) des Hundes, um zu prüfen, ob die Assays fälschlicherweise IgG nachweisen. Die Proben wurden kodiert, verblindet und randomisiert und anschließend von einem unabhängigen externen Prüfer an drei europäische Labore übermittelt, die jeweils unterschiedliche Testmethoden verwendeten: PAX (Nextmune AB, Schweden; molekularallergologisches Multiplex-Makroarray), MAC (IDEXX Laboratories, Hoofddorp; ELISA mit monoklonalem Antikörpercocktail) sowie Allercept (LABOKLIN, Bad Kissingen; Fcε-Rezeptor-basierter ELISA). Die Ergebnisse wurden gemäß den Schwellenwerten der Hersteller ausgewertet und anhand von Sensitivität, Spezifität, prozentualer Übereinstimmung, Cohen-Kappa und Variationskoeffizient (CV%) mit der vordefinierten IgE-Zusammensetzung verglichen.
Ergebnisse
Die drei Assays unterschieden sich signifikant in ihrer Fähigkeit, die vordefinierten IgE-Profile korrekt wiederzugeben. PAX klassifizierte alle 11 Seren korrekt (100 % Sensitivität, 100 % Spezifität, κ = 1,0; vollständige Übereinstimmung). MAC klassifizierte 3 von 11 Proben korrekt, mit einer Sensitivität von 33 %, einer Spezifität von 100 % und mäßiger Übereinstimmung (κ = 0,353). Allercept klassifizierte 2 von 11 Proben korrekt und zeigte sowohl falsch-negative als auch falsch-positive Reaktionen, was zu einer Sensitivität von 70 %, einer Spezifität von 42 % und einer schlechten Übereinstimmung (κ = 0,113) führte. Die Negativkontrolle wurde sowohl von PAX als auch von MAC korrekt als negativ ausgewiesen, während positive Reaktionen auf die Negativkontrolle zur geringeren Spezifität von Allercept beitrugen.
Die Intra-Assay-Reproduzierbarkeit wurde quantitativ anhand von vier Serumgemischen mit identischen, niedrigen Konzentrationen an spezifischem IgE gegen dasselbe Allergen bewertet. PAX wies einen niedrigen Variationskoeffizienten (1,8–7,4 %) auf, während sowohl MAC als auch Allercept eine deutlich höhere Variation zeigten (144,2 % bzw. 200 %), was auf eine schlechte Reproduzierbarkeit bei niedrigen IgE-Konzentrationen hindeutet.
Interpretation und klinische Relevanz
Die Autoren kommen zu dem Schluss, dass SAT-Methoden analytisch nicht austauschbar sind. Falsch-negative Ergebnisse können dazu führen, dass relevante Allergene fälschlicherweise aus der allergenspezifischen Immuntherapie (ASIT) ausgelassen werden, während falsch-positive Ergebnisse zur ungerechtfertigten Einbeziehung irrelevanter Allergene führen können. Die überlegene Leistungsfähigkeit des auf molekularer Allergologie basierenden Tests (PAX) wird auf die Verwendung definierter Allergenkomponenten zurückgeführt, im Gegensatz zu rohen Allergenextrakten, bei denen Schwankungen in der Zusammensetzung und niedrige Konzentrationen relevanter Komponenten wahrscheinlich zur verminderten Sensitivität der extraktbasierten Assays (MAC und Allercept) beitragen.
Eine wesentliche Stärke dieser Studie ist die Verwendung von Seren mit einer vordefinierten, monoklonalen IgE-Zusammensetzung, was eine direkte Genauigkeitsbewertung ermöglicht, die mit natürlich sensibilisiertem Hundeserum nicht erreichbar ist. Die kodierte, verblindete und randomisierte Probenabgabe minimiert das Risiko einer Verzerrung bei der Interpretation. Als Einschränkung weisen die Autoren darauf hin, dass künstliche Seren die biologische Komplexität von natürlich sensibilisiertem Hundeserum möglicherweise nicht vollständig widerspiegeln und dass weitere Forschungsarbeiten erforderlich sind, um zu ermitteln, inwieweit sich diese Ergebnisse auf die klinische Praxis übertragen lassen. Klicken Sie hier, um das Poster (auf Englisch) anzusehen.
Weitere Vorträge auf dem Kongress
Im Rahmen des „Cutting Edge“-Programms am Donnerstag, dem 27. August, wurden drei weitere freie Vorträge gehalten, die ebenfalls auf umfangreichen PAX-Datensätzen basierten:
Olivry und Mas-Fontao analysierten allergenspezifische IgE-Reaktionen auf Bienen- (Api m) und Wespengift (Ves v) bei 34.151 Hunden, 5.810 Katzen und 4.612 Pferden, die im Jahr 2025 europaweit mit PAX getestet wurden. Die komponentenaufgelösten Tests ergaben erhebliche Abweichungen gegenüber den extraktbasierten Ergebnissen: 40–59 % der Tiere, die positiv auf eine Bienengiftkomponente getestet wurden, reagierten negativ auf den übergeordneten Extrakt, bei Wespengift waren es 63–75 %. Die Ergebnisse sprechen für die routinemäßige Einbindung der komponentenaufgelösten Diagnostik in die klinische Praxis sowie für eine geografische Häufung von Sensibilisierungsmustern in ganz Europa.
Börjesson, Streets und Olivry untersuchten die saisonale Variabilität von pollen- und milben-spezifischem IgE bei skandinavischen Hunden (n = 5.014 PAX-Ergebnisse, März 2023–Februar 2024). Die Seropositivität für Baum- und Unkrautpollen erreichte im Frühjahr und Sommer ihren Höhepunkt, während die Seropositivität für Hausstaubmilben im Herbst und Winter signifikant höher war, bei Vorratsmilben zeigte sich ein umgekehrtes Muster. Die Autoren kommen zu dem Schluss, dass der Zeitpunkt der serologischen Probenahme für die Interpretation der Testergebnisse von Bedeutung ist. Diese Studie wurde als Open-Access-Artikel veröffentlicht (doi.org/10.3390/vetsci13060522).
Olivry und Mas-Fontao charakterisierten artspezifische Sensibilisierungsprofile für Hausstaubmilben (Dermatophagoides farinae und D. pteronyssinus) bei Hunden, Katzen und Pferden. Es wurden deutliche Unterschiede auf molekularer Ebene festgestellt: Katzen wiesen eine höhere Seropositivität gegenüber Der f 1 auf, Hunde gegenüber Der f/p 2 und Der p 11 und Pferde gegenüber Der p 5, 7, 10, 21, 23 sowie Der f 15. Auch die saisonale Dynamik unterschied sich je nach Tierart: Bei Hunden erreichte sie im Sommer ihren Höhepunkt, bei Pferden im Herbst, während Katzen die geringsten saisonalen Schwankungen aufwiesen.
Schlussfolgerung
Insgesamt unterstreichen die vier auf diesem Kongress vorgestellten Studien die Bedeutung methodischer Entscheidungen in der allergenspezifischen IgE-Diagnostik: von der analytischen Zuverlässigkeit der Testmethode selbst über den Mehrwert einer komponentaufgelösten Diagnostik bis hin zum Einfluss des Zeitpunkts der Probenahme auf die Testergebnisse. Das Poster von Krogh und Boysen liefert hierfür den direktesten Beweis, da es als erstes die analytische Genauigkeit von drei SAT-Methoden anhand von Seren mit einer bekannten – statt einer angenommenen – IgE-Zusammensetzung quantifiziert.
